小鼠单克隆抗体制备

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小鼠单克隆抗体简介:

本文地址:http://www.kcntq.com/Preparation-of-mouse-monoclonal-antibody.htm
文章摘要: 小鼠单克隆抗体制备,康宝莱一字之师泛美,向您编织带进帐。

单克隆抗体是由激活的B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合而成的单克隆杂交瘤细胞产生的。小鼠单克隆抗体是最常见最经典的单克隆抗体。同时小鼠也是生物学和医学领域中最常见的模式动物之一。

·   高度特异性

·   高度均一性

·   可快速、大量、连续生产

·   应用领域广泛,涵盖检测治疗等多个领域

·   制备方案和工具成熟

·   应用前景良好

安必奇的优势:

·   特有的免疫方法,节省宝贵时间

·   新型佐剂MagicTM免疫佐剂,仅需21天即可引起更快、更强的免疫效应

·   阳性杂交瘤细胞的高效筛选平台----Omni-HybridomaTM platform

·   MagicTM hybridoma growth factor提高细胞融合成功率存活率,使抗体稳定表达 

我们的小鼠单克隆抗体:

·   pM级的亲和性和高特异性

·   对各种抗原均有优秀的效果

·   可以识别区分转录后修饰(PTM

·   适用于甲醛固定的免疫组化

·   可大量制备具有生物活性的抗体


服务具体内容:

可使用小分子、多肽、修饰多肽、蛋白、融合蛋白、修饰蛋白等作为抗原进行单克隆抗体制备。同时,我们也提供抗原制备服务,包括DNA合成、质粒构建、蛋白表达、蛋白纯化、蛋白修饰、多肽合成、多肽修饰、多肽与载体蛋白交联、小分子结构分析及与载体蛋白交联等。如客户需要,我们还提供抗体提纯及抗体鉴定服务。

(所涉及转录后修饰一般包括:磷酸化、甲基化、乙酰化、泛素化修饰等)

小鼠单克隆抗体制备流程:

步骤

服务内容

周期

1. 动物免疫 1. 免疫5只小鼠,进行2-3次免疫;
2. 采集5只小鼠血清,分别做ELISA检测;
3. 提供鉴定报告。
4-6
2.杂交瘤制备 效价合格后,经客户同意后,进行融合实验:
1. 选取血清效价最高的小鼠的取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合。
2.有限稀释融合细胞,96孔板克隆化;
3. HAT筛选杂交瘤细胞;
4. 免疫原检测,检测出抗原阳性1-10个阳性细胞,扩大培养至48孔板;
5. 挑取阳性克隆扩增,微量-80度冻存细胞【冻存细胞可保存1年以上】;
6. 提供客户1ml上清/阳性克隆,供客户检测,检测结果20天内反馈。
客户根据自己的ELISA检测、功能检测结果,挑选阳性克隆;丢弃其余克隆。如果客户需要保存其余克隆,需要提前沟通,另行约定费用和保存方式。


4-6
3.亚克隆 根据客户的要求,选取阳性克隆进行亚克隆:
1. 每个克隆做96孔板有限稀释培养,ELISA筛选阳性亚克隆;
2. 阳性克隆扩增,少量-80度冻存细胞;
3. 提供1ml杂交瘤细胞上清,供客户进行检测;检测结果请在20天内反馈。
套餐中包括总共不超过3个阳性亚克隆细胞,默认根据结果最佳的3个阳性亚克隆,放大至T-25 Flask培养,ELISA再次确认后进行细胞冻存,每个亚克隆冻存3管细胞。
1-3
4. 腹水制备(可选) 1. 客户选取的杂交瘤细胞制备腹水,免疫2只小鼠,Protein A纯化腹水,ELISA检测效价;
2. 提供纯化后杂交瘤细胞,<5mg/clone
3. 提供实验报告和剩余腹水抗体;
注:亦可选择细胞上清纯化。

1-3

5. 套餐外阳性杂交瘤细胞的选取(可选) 套餐(3个亚克隆)之外的其它备选细胞, 若客户需要亚克隆,每额外增加一个亚克隆, 需要额外支付的费用。 N/A
6.抗体配对(可选) 1.若干株阳性单抗两两组合,进行夹心ELISA实验;
2.根据夹心ELISA实验结果挑选配对抗体;
3.出具相关的检测报告提供给客户。
2-4
7.功能验证(可选) 可以根据客户对抗体的要求进行ELISAWB等实验的检验验证,确定制备获得的抗体是否可用于该实验。 1-3
8.保证型服务(可选) 重复前述实验(杂交瘤制备,抗体纯化和检测实验。如有必要则重复动物免疫实验)直至获得符合要求的抗血清或纯化抗体。 N/A

我们承诺:
  • 动物在SPF条件下饲养
  • 使用进口耗材和试剂(CorningGibcoHyClone或具有同等质量的品牌)

您将收获:
  • 完整详实的实验报告和鉴定/验证报告
  • 阳性杂交瘤上清(用于客户鉴定和挑选)
  • 3株阳性细胞株亚克隆(或选择直接阳性克隆扩大培养)
  • 纯化的高特异性与高亲和性的小鼠源单克隆抗体