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本文地址:http://www.kcntq.com/Methylation-sequencing-services.htm
文章摘要: 甲基化测序服务,口角春风访问者钨酸,第四步剥削者自考办。

DNA甲基化是表观遗传修饰的主要方式,在DNA甲基转移酶(DNA Methyltransferase, DNMT)催化作用下,利用S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)提供甲基,在CpG二核苷酸中胞嘧啶嘧啶环的五号碳原子上加上甲基的共价修饰过程。一般,DNA甲基化抑制基因表达,去甲基化则诱导了基因的重新活化。这种DNA修饰的方式不改变DNA的一级结构,却在细胞的发育、基因的表达、及基因组的稳定性中起着重要的作用。在胚胎发育、肿瘤发病过程中起重要的调控作用,是目前表观遗传学研究的热点。

北京安必奇生物的甲基化检测服务可选择亚硫酸氢盐测序法(BSP)、甲基化特异性的PCR(MSP) 法、亚硫酸盐修饰后的限制性内切酶法(COBRA)等方法。我们同时可以提供全基因组甲基化检测、简化全基因组检测、特定基因的甲基化检测以及850K芯片检测。

1.亚硫酸氢盐测序法(BSP)

用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。针对要调查的区域设计BSP引物进行PCR扩增,对扩增产物进行测序就可以判断哪些CpG位点发生了甲基化。

2.甲基化特异性的PCR法(MSP)

用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。设计针对某一待测位点的甲基化和非甲基化引物进行PCR扩增,通过电泳检测MSP扩增产物判定待测样本是否存在甲基化位点。MSP法灵敏度较高,应用范围广[1]。

3.结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(COBRA)

先用亚硫酸氢钠处理 DNA,然后对检测部位进行 PCR 扩增,再选用可切开检测位点的限制性内切酶酶切 PCR 产物。若其识别序列中的胞嘧啶被甲基化,因胞嘧啶保持不变,该位点仍能被限制性内切酶酶切;相反,则不再被原来的限制性内切酶识别。最后进行电泳分析即可检测出DNA 的甲基化状态及甲基化程度[2]。

客户提供样品
  • 血液样品:样品为EDTA 抗凝或枸椽酸钠抗凝,样品量大于0.5 ml,样品采集后于-20°C 或-80°C 保存;
  • 组织样品:样品可以为新鲜组织(最好-80°C 保存)或石蜡包埋的组织,也可以是95%乙醇中固定的组织,组织量大于100 mg。
客户提供信息
提供详细的基因信息(序列或NCBI 登录号)。

甲基化服务订单表

参考文献
[1] Herman J G, Graff J R, My?h?nen S, et al. Methylation-specific PCR: a novel PCR assay for methylation status of CpG islands[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 1996, 93(18): 9821-9826.
[2] Xiong Z, Laird P W. COBRA: a sensitive and quantitative DNA methylation assay[J]. Nucleic acids research, 1997, 25(12): 2532-2534.

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